G418簡介

G418的結(jié)構(gòu)中包含雙堿基環(huán)醇和2-脫氧鏈霉胺，它們通過糖苷鍵與氨基糖連接。G418的結(jié)構(gòu)獨特性源于 C-6 位置的羥基功能而不是氨基功能。這種差異使其能與80S核糖體復合物特異性結(jié)合，與其他非特異性結(jié)合真核細胞核糖體的氨基糖苷類藥物相比，G418 抑制真核細胞蛋白合成的作用更強。而氨基糖苷類修飾酶，即氨基糖苷類磷酸轉(zhuǎn)移酶（APH），可共價修飾抗生素（如G418）的氨基或羥基功能，削弱藥物-核糖體的相互作用，從而妨礙G418發(fā)揮功能，即表現(xiàn)為耐藥的效果。

當新霉素抗性基因被成功轉(zhuǎn)染進真核細胞后，可獲得抗性產(chǎn)物氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶的高效表達，使細胞獲得抗性而能在含有G418的選擇性培養(yǎng)基中生長。因此G418作為一種有效的真核翻譯抑制劑，被廣泛用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染新霉素抗性基因（表達氨基糖苷類修飾酶）的真核細胞的選擇和維持。推薦常用的篩選濃度范圍為 100-800 μg/mL?？股氐挠行麧舛葧蚣毎愋?、培養(yǎng)基、生長條件、細胞密度、細胞的代謝速率和所處的細胞周期而異。為了克服這些變量并確保成功，理想情況下，應通過實驗確定每個特定的培養(yǎng)系統(tǒng)的工作濃度，以及引入新變量時的工作濃度。工作濃度可以通過繪制劑量反應曲線來確定。當在新的細胞系統(tǒng)中使用G418硫酸鹽時，建議繪制全劑量曲線，并且在每次使用新批次的G418硫酸鹽時，重制劑量曲線。

作用機制

G418的結(jié)構(gòu)中含有雙堿基環(huán)醇和2-脫氧鏈霉胺，這些結(jié)構(gòu)通過糖苷鍵與氨基糖連接。G418的獨特性來源于其C-6位置的羥基功能，而非氨基功能。這種結(jié)構(gòu)上的差異使得G418能夠與80S核糖體復合物特異性結(jié)合，相較于其他氨基糖苷類藥物，G418對真核細胞蛋白質(zhì)合成的抑制作用更為顯著。

篩選應用

G418常被用于篩選表達氨基糖苷類修飾酶的細胞株。這些修飾酶，如氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶（APH），能夠共價修飾G418的氨基或羥基功能，削弱藥物與核糖體的相互作用，從而產(chǎn)生耐藥效果。當真核細胞成功轉(zhuǎn)染新霉素抗性基因后，它們能夠高效表達氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶，獲得在含有G418的選擇性培養(yǎng)基中生長的能力。

推薦使用濃度

G418作為真核翻譯抑制劑的推薦篩選濃度范圍為100-800 μg/mL。然而，有效的殺傷濃度會因細胞類型、培養(yǎng)基、生長條件等多種因素而異。因此，為了確保篩選的成功，建議通過實驗確定每個特定培養(yǎng)系統(tǒng)的工作濃度。

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