產品英文名稱：CB031-0081 / Human MSC medium, chemically-defined
產品中文名稱：間充質干細胞無血清培養(yǎng)基CB031-0081

間充質干細胞無血清培養(yǎng)基是 為擴增從骨髓、臍帶血或脂肪組織提取的人類間充質干細胞（human mesenchymalstem cells, hMSC)而設計的無血清培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基化學成分明確，所有組分為化學合成或重組純化的蛋白，并且無異源蛋白，不含直接從任何動物組織提取成份。因此它 不存在批間誤差和潛在的動物源性病原體。如果配合使用特定的培養(yǎng)板（見下)，還可以省去鋪板的工序和時間，免去鋪板膠的費用。

Excell CB031-0081 / Human MSC medium, chemically-defined 的產品信息
基礎培養(yǎng)基 450ml  2-8℃避光 可以保存6個月
添加物 50ml  -80℃避光，避免反復凍融可以保存 6個月

Excell CB031-0081 / Human MSC medium, chemically-defined 的使用方法
一 培養(yǎng)基配制：
1. 過夜2‐8°C解凍添加物。
2. 無菌條件下配制100ml間充質干細胞無血清完全培養(yǎng)基。
3.如果需要也可加入抗菌素（自選)。
配制好的間充質干細胞無血清完全培養(yǎng)液（包含基礎培養(yǎng)基、添加物、谷氨酸鹽）2-8°C 避光保存，保存期1 個月。
二 培養(yǎng)基的使用：
培養(yǎng)于其它無血清或有血清培養(yǎng)基的MSCs 可以快捷方便地轉換到本品中培養(yǎng)。多數(shù)情況下，生長狀態(tài)良好的MSCs直接換液為本品即可。個別情況下，可能需要逐步轉換，如按20%，40%，60%，80%，100%依次遞增，至最終完全使用本品。
三 hMSCs細胞的復蘇：
1.37°C水浴快速復蘇凍融細胞。
2.將細胞轉移到無菌50ml離心管中。
3.逐滴向裝有1ml細胞液的離心管中加入10ml預先復溫的間充質干細胞無血清完全培養(yǎng)基，注意邊加邊輕輕晃動離心管。
4.將上述混合溶液轉移到細胞培養(yǎng)瓶或細胞培養(yǎng)板中。
5.在5%CO2，37°C培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
6.培養(yǎng)24h，換液。
7.此后每隔2天換液，直到傳代培養(yǎng)。
四 傳代培養(yǎng)：
如果使用特定的細胞培養(yǎng)板，如BD PrimariaTM 系列產品或Corning CellBINDTM 系列產品，那么使用本產品培養(yǎng)間充質干細胞是不需要預先鋪板。傳統(tǒng)的細胞培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)板是否無需鋪板正在評估中。對于那些還沒有被評估的產品或不適用于不 預先鋪板工序的產品，推薦使用人纖維連接蛋白（Fibronectin)進行鋪板。
1.在鏡下觀察（使用本產品或其它培養(yǎng)基)細胞，確定傳代的時間，推薦在細胞量達到70%滿的時候傳代，不要讓細胞超過80%滿！
2.預先將0.05%胰酶/0.53mM EDTA和間充質干細胞無血清完全培養(yǎng)基復溫到37°C待用。
3.用移液槍吸走舊培養(yǎng)基。
4.用DPBS洗一遍（自選)。
5.加入0.05%胰酶/0.53mM EDTA液以覆蓋住細胞表面，推薦室溫消化細胞（消化液用量：6孔板每孔約10cm2加入0.5ml，25cm2培養(yǎng)板加入1ml)。
6. 鏡下觀察細胞，當看見細胞開始從培養(yǎng)板底脫離，輕輕敲擊培養(yǎng)板邊緣幫助細胞脫落。消化時間為1‐3分鐘。
7. 加入2倍于消化液體積的間充質干細胞無血清完全培養(yǎng)基，將細胞懸液收集于15ml離心管中。
8.1200rpm離心10分鐘。
9.盡量棄去離心后的上層清液。用間充質干細胞無血清完全培養(yǎng)基重懸細胞。此時可取細胞懸液進行細胞計數(shù)。
10.按照3-5X103/cm2密度接種細胞。
11.5%CO2，37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
12.每隔2天換新鮮的間充質干細胞無血清完全培養(yǎng)基。
13.當細胞生長達到70%滿時，傳代（一般每隔3-4天)。
五 凍存細胞：
1.配制細胞凍存液。
2.離心分離細胞，用凍存液重懸細胞。
3.將凍存管轉移到凍存盒中，置于-80°C冰箱過夜。
4.將細胞轉移到液氮罐中長期貯存。

Excell 間充質干細胞無血清培養(yǎng)基CB031-0081 產品英文描述
Serum free medium for amplification of extracted from bone marrow, umbilical cord blood and adipose tissue of human mesenchymal stem cells, mesenchymal stem cells (human mesenchymalstem cells, hMSC) of serum free medium and design. The culture medium composition clearly, all components for chemical synthesis and purification of recombinant protein, and no heterologous protein, containing no ingredients directly from any animal tissue. Therefore, it does not exist between errors and the potential of animal pathogens. If used in conjunction with the culture plate specific (see below), but also can save time and planking, relieve the cost of glue.