產(chǎn)品英文名稱(chēng)：DNA Damage Quantification Kit-AP Site Counting
產(chǎn)品中文名稱(chēng)：DNA損傷定量試劑盒-AP位點(diǎn)計(jì)數(shù)

DNA Damage Quantification Kit-AP Site Counting 產(chǎn)品特性
測(cè)定基因組DNA樣品中無(wú)堿基位點(diǎn)的數(shù)目
比色微板法檢測(cè)
檢測(cè)范圍：1-40個(gè)abasic sites / 1×105個(gè)堿基對(duì)的DNA

DNA Damage Quantification Kit-AP Site Counting 概述
DNA的氧化損傷是由于DNA與活性氧 (ROS) 尤其是羥自由基之間的相互作用造成的。由超氧陰離子和過(guò)氧化氫通過(guò)Fenton反應(yīng)產(chǎn)生的羥自由基在DNA中產(chǎn)生多重修飾。羥自由基對(duì)脫氧核糖基團(tuán)的氧化攻擊將導(dǎo)致DNA釋放自由堿基，產(chǎn)生鏈斷裂、各種糖修飾以及單個(gè)無(wú)堿基位點(diǎn) (AP位點(diǎn)) 。事實(shí)上，AP位點(diǎn)是由ROS產(chǎn)生的損傷的主要類(lèi)型。醛反應(yīng)性探針 (ARP； -氨氧基甲基羰基肼-D-生物素) 特異性地與AP位點(diǎn)的開(kāi)環(huán)上的醛基反應(yīng)。通過(guò)這個(gè)反應(yīng)可以檢測(cè)到導(dǎo)致醛基形成的DNA修飾。用過(guò)量ARP試劑反應(yīng)后，DNA上的所有AP位點(diǎn)均用生物素做了標(biāo)簽。可以用親和素-生物素法，用連接到親和素上的過(guò)氧化物酶或堿性磷酸酶做比色法檢測(cè)來(lái)對(duì)這些帶有生物素標(biāo)簽的AP位點(diǎn)進(jìn)行計(jì)數(shù)。DNA損傷定量試劑盒包含用于檢測(cè)每1×105個(gè)堿基對(duì)中1-40個(gè)AP位點(diǎn)的所有必需溶液。

DNA Damage Quantification Kit-AP Site Counting 試劑盒內(nèi)容
ARP solution.................................250 μl × 1管
ARP-DNA standard solution.........不同濃度各250 μl
Filtration tube................................20管
Washing buffer.............................1包
96孔板..........................................1塊
DNA binding solution..........10 ml × 1瓶
Substrate solution...............10 ml × 1瓶
TE buffer.............................40 ml × 1瓶
HRP-streptavidin................ 25 μl × 1管

DNA Damage Quantification Kit-AP Site Counting 注意事項(xiàng)
1.請(qǐng)將試劑盒在0-5℃保存，不要冷凍。Washing buffer Solution在室溫保存。
2.AP-DNA不穩(wěn)定，從樣品中分離出基因組DNA后請(qǐng)用ARP處理并用過(guò)濾管純化。純化的ARP-DNA在0-5℃可以保存1年。
3.純化ARP-DNA后應(yīng)立即加入200 μl TE buffer，如果旋轉(zhuǎn)震蕩后的DNA放在過(guò)濾管中超過(guò)30分鐘，DNA的回收率會(huì)下降。 在混合DNA Solution和DNA Binding Solution時(shí)，使用γ射線消毒的過(guò)濾管會(huì)造成DNA粘附在過(guò)濾管上，
4.如果一定要使用過(guò)濾管，請(qǐng)不要使用γ射線消毒的過(guò)濾管。
5.如果想精確測(cè)定樣品DNA的AP位點(diǎn)數(shù)量，建議重復(fù)多次測(cè)定。
6.如果樣品DNA Solution少于10 μl，請(qǐng)用等量的ARP Solution，在用過(guò)濾管純化后要測(cè)定DNA的濃度。
7.在測(cè)定時(shí)如果沒(méi)有630-670 nm的濾波片，可以從每孔中吸取50 μl溶液到一個(gè)新的96孔板中，每孔加入50 μl 1 M濃度的硫酸（sulfuric acid），在450 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)。
8.剩余的溶液會(huì)帶來(lái)誤差，在每一步可以采用在紙巾上充分拍打96孔板的方式去除剩余的溶液。